Trypsin-2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423519

Descripción general

Prss2 codifica la tripsina-2, una proteasa serina secretada que se produce como zimógeno y se activa en cascadas proteolíticas que regulan la digestión y el procesamiento de proteínas extracelulares en el páncreas de ratón. Más allá de la proteólisis de nutrientes, la tripsina-2 puede influir en la remodelación tisular y en la señalización inflamatoria al activar otras proteasas y modular las vías de los receptores activados por proteasas, con efectos posteriores sobre la integridad epitelial y las respuestas inmunitarias innatas. La actividad de la tripsina desregulada se asocia con estrés de los acinos pancreáticos, activación proteasa aberrante y daño inflamatorio, lo que convierte a Prss2 en un nodo relevante para estudiar la fisiología del páncreas exocrino y la patología impulsada por proteasas. Los modelos murinos de Prss2 permiten trabajos mecanísticos sobre proteostasis, carga de la vía secretora e interacciones de redes de proteasas en contextos pancreáticos y gastrointestinales.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Trypsin-2 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Prss2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Prss2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Prss2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Trypsin-2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Prss2 para la investigación de la señalización de Trypsin-2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Prss2 críticos para la función de Trypsin-2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Prss2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Trypsin-2 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Trypsin-2 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Prss2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Trypsin-2 (m) y el plásmido HDR Trypsin-2 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Prss2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Prss2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.