Plasmide CRISPR d'Activation (h) TrxR2: sc-402671-ACT

Le gène humain **TXNRD2** code la **thioredoxine réductase mitochondriale 2 (TrxR2)**, une sélénoprotéine qui maintient la **thioredoxine‑2** à l’état réduit afin de préserver l’homéostasie rédox mitochondriale. TrxR2 associe la défense antioxydante dépendante du **NADPH** au contrôle des **espèces réactives de l’oxygène**, de l’état des thiols des protéines mitochondriales et des voies de signalisation sensibles au rédox, qui influencent l’apoptose et l’adaptation métabolique. Par son rôle dans les systèmes **thioredoxine** et **pérorédoxine**, TXNRD2 contribue à l’intégrité de la phosphorylation oxydative et aux réponses cellulaires au stress oxydant. Une dérégulation du contrôle rédox mitochondrial impliquant TXNRD2 a été associée à des situations de métabolisme altéré, de neurodégénérescence et de biologie des cancers, ce qui motive des études mécanistiques de phénotypes dépendants du rédox.

TrxR2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TXNRD2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TrxR2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TXNRD2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TXNRD2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TrxR2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TXNRD2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TrxR2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TrxR2 dans les cellules tumorales présentant une expression de TXNRD2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.