TrpRS CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423692

Übersicht

Wars kodiert die Tryptophanyl-tRNA-Synthetase (TrpRS), eine zytosolische Aminoacyl-tRNA-Synthetase, die L-Tryptophan an die entsprechende tRNATrp ligiert und damit die beladene tRNA bereitstellt, die für eine genaue mRNA-Translation erforderlich ist. Durch die Kontrolle der tRNA-Beladung und die Unterstützung der ribosomalen Elongation trägt TrpRS dazu bei, die Nährstoffverfügbarkeit mit der Proteinsynthese sowie zellulären Stressanpassungsprogrammen zu koppeln. Störungen der Aktivität von Aminoacyl-tRNA-Synthetasen können die Proteostase, integrierte Stresssignalwege und die Translationsfidelität beeinflussen – Prozesse, die häufig mit Entzündung, Neurodegeneration und onkogener Transformation in Verbindung gebracht werden. Mouse Wars ist daher ein nützlicher Ansatzpunkt, um zu untersuchen, wie eine veränderte Translationskapazität den Zellzustand und krankheitsrelevante Phänotypen in vitro und in vivo umformt.

Das TrpRS CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Wars-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Wars-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Wars nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die TrpRS-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Wars-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der TrpRS-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Wars-Exone abzielen, die für die TrpRS-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Wars-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom TrpRS CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom TrpRS CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Wars-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das TrpRS HDR-Plasmid (m) und TrpRS HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Wars-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Wars-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.