Troponin I-FS Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401530

Visão geral

TNNI2 codifica a troponina I do músculo esquelético de contração rápida (Troponina I-FS), a subunidade inibitória do complexo de troponina que regula as interações actina–miosina de forma dependente de Ca²⁺. Ao ligar-se à tropomiosina e à actina, a Troponina I-FS ajuda a alternar o filamento fino entre os estados relaxado e contrátil a jusante do acoplamento excitação–contração sarcomérico. A atividade de TNNI2 integra-se com a sinalização do cálcio, a miofibrilogénese e programas contráteis específicos do tipo de fibra muscular que moldam a produção de força e a resistência à fadiga. Perturbações genéticas que afetam a regulação da troponina e a função do sarcómero estão associadas a fenótipos hereditários de contratura e miopatia do músculo esquelético, tornando o TNNI2 um alvo relevante para estudos mecanísticos da fisiologia muscular e de defeitos contráteis associados a doença.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Troponin I-FS (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene TNNI2 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do TNNI2, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do TNNI2 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Troponin I-FS.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de TNNI2 para a investigação da sinalização de Troponin I-FS, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) TNNI2 críticos para a função Troponin I-FS
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos TNNI2 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo Troponin I-FS Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo Troponin I-FS Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus TNNI2. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo Troponin I-FS Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR Troponin I-FS (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia TNNI2 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo TNNI2 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.