Tropomyosin β CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423482

Übersicht

Tpm2 kodiert Tropomyosin β, ein aktinbindendes Coiled-Coil-Protein, das entlang von F‑Aktin polymerisiert, um dünne Filamente zu stabilisieren und den Zugang von Myosinmotoren sowie aktinassoziierten Faktoren zu regulieren. In Muskel- und Nichtmuskelzellen tragen Tropomyosin-Isoformen zu Kontraktilität, zytoskelettaler Spannung, Zellform und Mechanotransduktion bei, indem sie die Dynamik von Aktinfilamenten in Stressfasern und sarkomerischen Strukturen feinabstimmen. Über seine Rolle in der Organisation des Aktomyosin-Apparats beeinflusst TPM2 Prozesse wie Zellmigration, Umbau von Adhäsionen und Kraftgenerierung, die mit Rho‑GTPase-abhängigen Signalwegen des Zytoskeletts verknüpft sind. Eine Fehlregulation der Tropomyosin-Zusammensetzung und der Kontrolle von Aktinfilamenten ist relevant für Störungen der Muskelstruktur und -funktion sowie für zytoskelettgetriebene Phänotypen, die in Entwicklungs- und Krankheitsmodellen untersucht werden.

Das Tropomyosin β CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Tpm2-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Tpm2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Tpm2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Tropomyosin β-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Tpm2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Tropomyosin β-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Tpm2-Exone abzielen, die für die Tropomyosin β-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Tpm2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Tropomyosin β CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Tropomyosin β CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Tpm2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Tropomyosin β HDR-Plasmid (m) und Tropomyosin β HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Tpm2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Tpm2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.