trichoplein CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-407983

Übersicht

TCHP kodiert Trichoplein, ein zentriolares und mikrotubuliassoziiertes Protein, das die Centrosomenfunktion und die Dynamik der primären Zilie reguliert und damit den Zellzyklusfortschritt mit ziliärer Signalgebung verknüpft. Trichoplein wurde mit der Kontrolle der Ziliogenese in Verbindung gebracht, unter anderem über Interaktionen mit Zellzykluskinasen und centrosomalen Regulatoren, wodurch es die Organisation des Zytoskeletts und die mitotische Genauigkeit beeinflusst. Über seine Effekte auf zilienabhängige Signalwege und die Integrität des Centrosoms kann eine veränderte TCHP-Aktivität Proliferation, Differenzierung und Stressantworten stören. Eine Dysregulation der Zilien-/Centrosomen-Homöostase ist für mechanistische Studien zu Entwicklungsstörungen und krebsassoziierten Phänotypen relevant, wodurch TCHP einen nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung von Signalwegen darstellt.

Das trichoplein CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des TCHP-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des TCHP-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von TCHP nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die trichoplein-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von TCHP-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der trichoplein-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf TCHP-Exone abzielen, die für die trichoplein-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere TCHP-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom trichoplein CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom trichoplein CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des TCHP-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das trichoplein HDR-Plasmid (h) und trichoplein HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von TCHP-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten TCHP-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.