TRAF1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423492

Übersicht

Traf1 kodiert den Tumornekrosefaktor‑Rezeptor‑assoziierten Faktor 1 (TRAF1), ein Adapterprotein, das Mitglieder der TNF‑Rezeptor‑Superfamilie mit nachgeschalteten Signalkomplexen koppelt. In immunologischen und entzündlichen Kontexten moduliert TRAF1 die kanonische und nichtkanonische NF‑κB‑Signalgebung, beeinflusst die Outputs des MAPK‑Signalwegs und trägt durch Interaktionen mit Proteinen wie TRAF2 und cIAPs dazu bei, Entscheidungen zwischen Apoptose und Zellüberleben zu steuern. Diese Aktivitäten tragen zur Regulation von Zytokinantworten, zur Aktivierung von Lymphozyten und zur angeborenen Immunsignalgebung bei, wodurch Traf1 einen nützlichen Knotenpunkt zur Analyse der Signalintegration in Immunzellen darstellt. Fehlregulierte TRAF1‑assoziierte Signalwege wurden mit Mechanismen entzündlicher Erkrankungen sowie mit für die Immunonkologie relevanter Signalgebung in der Mikroumgebung in Verbindung gebracht, was seine breite Nutzbarkeit in signalwegfokussierten Forschungsmodellen unterstreicht.

Das TRAF1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Traf1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Traf1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Traf1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die TRAF1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Traf1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der TRAF1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Traf1-Exone abzielen, die für die TRAF1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Traf1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom TRAF1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom TRAF1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Traf1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das TRAF1 HDR-Plasmid (m) und TRAF1 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Traf1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Traf1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.