TPST-2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423487

Visão geral

Tpst2 codifica a tirosilproteína sulfotransferase 2 (TPST-2), uma enzima residente no complexo de Golgi que catalisa a O-sulfatação pós-traducional de tirosinas em proteínas secretadas e de membrana, utilizando PAPS como doador de sulfato. Essa modificação molda interações proteína–proteína e o reconhecimento receptor–ligante, influenciando a sinalização de quimiocinas, o tráfego de leucócitos e outros processos de comunicação extracelular. A atividade da TPST-2 contribui para a maturação e a função adequadas de diversos hormônios peptídicos e moléculas de adesão, conectando a sulfatação dependente de Tpst2 à homeostase imune e endócrina. A desregulação da sulfatação de tirosina tem sido associada a alterações na sinalização inflamatória e a fenótipos reprodutivos, tornando Tpst2 um ponto útil para estudar redes de sinalização dependentes de sulfatação em modelos murinos.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO TPST-2 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Tpst2 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Tpst2, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Tpst2 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína TPST-2.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Tpst2 para a investigação da sinalização de TPST-2, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Tpst2 críticos para a função TPST-2
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Tpst2 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo TPST-2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo TPST-2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Tpst2. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo TPST-2 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR TPST-2 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Tpst2 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Tpst2 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.