Plasmide CRISPR/Cas9 KO TPMT (m): sc-423483

Présentation

Tpmt code la thiopurine S‑méthyltransférase (TPMT), une méthyltransférase cytosolique dépendante de la S‑adénosyl‑L‑méthionine qui catalyse la S‑méthylation des thiopurines et d’autres substrats apparentés contenant du soufre. Dans les cellules de souris, l’activité de la TPMT contribue au métabolisme des xénobiotiques et des analogues nucléotidiques, en modulant les pools intracellulaires de nucléotides de thioguanine et leurs effets en aval sur le stress de réplication de l’ADN et la signalisation des dommages. La variation de la fonction de la TPMT est largement utilisée comme modèle pour étudier les déterminants de la sensibilité aux thiopurines et les mécanismes de toxicité hématopoïétique, sans préjuger d’une application clinique. Tpmt est donc pertinent pour les voies reliant la biotransformation des médicaments, l’équilibre rédox et l’intégrité du génome dans les tissus prolifératifs.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TPMT (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Tpmt dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Tpmt, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Tpmt à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TPMT.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Tpmt pour l'étude de la signalisation de TPMT, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Tpmt essentiels à la fonction de TPMT
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Tpmt pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le TPMT plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le TPMT plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Tpmt. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le TPMT plasmide HDR (m) et le TPMT (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Tpmt pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Tpmt définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.