Tns2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-411726

Übersicht

TNS2 kodiert Tensin-2 (Tns2), einen mit Fokalkontakten assoziierten zytoskelettalen Adapter, der Integrinrezeptoren mit dem Aktinnetzwerk verbindet und die Signalorganisation an Zell–Matrix-Kontaktstellen koordiniert. Über seine modularen Domänen steuert Tns2 den Aufbau und den Turnover von Adhäsionskomplexen und moduliert Signalwege, die an Zellspreitung, Migration und Mechanotransduktion beteiligt sind, darunter phosphoinositidabhängige Signalübertragung und an Rezeptor-Tyrosinkinasen gekoppelte Ereignisse. Eine veränderte TNS2-Funktion wurde mit einer fehlregulierten Adhäsionssignalgebung und gestörter Gewebehomöostase in Verbindung gebracht, mit besonderer Relevanz für die glomeruläre Biologie der Niere und die Integrität von Podozyten. Diese Eigenschaften machen TNS2 zu einem geeigneten Knotenpunkt für die Untersuchung von adhäsionsgetriebener Signalgebung, Zytoskelett-Remodelling und kontextabhängigen Veränderungen der zellulären Invasivität und Differenzierung.

Das Tns2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des TNS2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des TNS2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von TNS2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Tns2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von TNS2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Tns2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf TNS2-Exone abzielen, die für die Tns2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere TNS2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Tns2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Tns2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des TNS2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Tns2 HDR-Plasmid (h) und Tns2 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von TNS2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten TNS2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.