Plasmide CRISPR/Cas9 KO Tns2 (h): sc-411726

Présentation

TNS2 code la tensine-2 (Tns2), une protéine adaptatrice du cytosquelette associée aux adhérences focales, qui relie les récepteurs des intégrines au réseau d’actine et organise la signalisation aux sites de contact cellule–matrice. Grâce à ses domaines modulaires, Tns2 coordonne l’assemblage et le renouvellement des complexes d’adhérence et module des voies impliquées dans l’étalement cellulaire, la migration et la mécanotransduction, notamment la signalisation dépendante des phosphoinositides et les événements couplés aux récepteurs à activité tyrosine kinase. Une altération de la fonction de TNS2 a été associée à une dérégulation de la signalisation liée à l’adhérence et de l’homéostasie tissulaire, avec une pertinence particulière pour la biologie glomérulaire rénale et l’intégrité des podocytes. Ces propriétés font de TNS2 un nœud utile pour étudier la signalisation induite par l’adhérence, le remodelage du cytosquelette et les changements contextuels de l’invasivité et de la différenciation cellulaires.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Tns2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène TNS2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du TNS2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert TNS2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Tns2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en TNS2 pour l'étude de la signalisation de Tns2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de TNS2 essentiels à la fonction de Tns2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de TNS2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Tns2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Tns2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus TNS2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Tns2 plasmide HDR (h) et le Tns2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie TNS2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles TNS2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.