Plásmido Doble Nickase (h) TNIK: sc-401523-NIC

TNIK (TRAF2 and NCK interacting kinase) codifica una quinasa de serina/treonina de la familia de quinasas del centro germinal que integra señales que controlan la organización del citoesqueleto, la polaridad celular y los programas transcripcionales. TNIK actúa como regulador de la señalización Wnt/β-catenina mediante interacciones con los complejos transcripcionales TCF/LEF y contribuye a vías que influyen en la adhesión, la migración y el desarrollo neuronal. La actividad o expresión desregulada de TNIK se ha asociado con una salida aberrante de la vía Wnt y con fenotipos proliferativos o invasivos alterados en múltiples contextos patológicos, lo que la convierte en un nodo útil para estudios mecanísticos del control de redes de señalización. En células humanas, TNIK también se estudia por sus funciones en la actividad sináptica y en la comunicación cruzada de señalización impulsada por quinasas que moldea las transiciones de estado celular.

TNIK El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus TNIK en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de TNIK. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de TNIK. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con TNIK alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.