TMEM205 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-433421

Descripción general

Tmem205 codifica TMEM205, una proteína de membrana multipaso implicada en procesos de transporte celular en la membrana plasmática y el sistema endomembranoso, con funciones descritas en la regulación de la acumulación intracelular y la expulsión (eflujo) de xenobióticos y compuestos que contienen metales. TMEM205 se ha relacionado con la remodelación adaptativa al estrés del tráfico de membranas y el transporte vesicular, procesos que se solapan con la proteostasis y la respuesta celular a agresiones citotóxicas. La expresión alterada de TMEM205 se ha asociado con fenotipos de respuesta a fármacos en modelos de cáncer, lo que la convierte en una diana útil para dilucidar mecanismos de quimiorresistencia y la regulación del transporte a través de membranas. En sistemas de ratón, la perturbación de Tmem205 puede ayudar a aclarar cómo las proteínas de membrana tipo transportador influyen en la homeostasis celular y en la sensibilidad a desafíos ambientales.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO TMEM205 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Tmem205 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Tmem205 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Tmem205 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína TMEM205.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Tmem205 para la investigación de la señalización de TMEM205, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Tmem205 críticos para la función de TMEM205
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Tmem205 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido TMEM205 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido TMEM205 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Tmem205. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR TMEM205 (m) y el plásmido HDR TMEM205 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Tmem205 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Tmem205 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.