TMEM205 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-433421

Übersicht

Tmem205 kodiert TMEM205, ein mehrfach transmembranöses Membranprotein, das an zellulären Transportprozessen an der Plasmamembran und im Endomembransystem beteiligt ist. Berichtet wurden unter anderem Funktionen bei der Regulation der intrazellulären Anreicherung und des Efflux von Xenobiotika sowie metallhaltigen Verbindungen. TMEM205 wird zudem mit einer stressadaptiven Umgestaltung des Membrantraffickings und des vesikulären Transports in Verbindung gebracht – Prozesse, die mit der Proteostase und der zellulären Antwort auf zytotoxische Belastungen verknüpft sind. Eine veränderte TMEM205-Expression wurde in Krebsmodellen mit Phänotypen des Arzneimittelansprechens assoziiert, was TMEM205 zu einem nützlichen Ziel macht, um Mechanismen der Chemoresistenz und der Regulation des Membrantransports zu untersuchen. In Mausmodellen kann eine Störung von Tmem205 dabei helfen zu klären, wie transporterähnliche Membranproteine die zelluläre Homöostase und die Empfindlichkeit gegenüber Umweltbelastungen beeinflussen.

Das TMEM205 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Tmem205-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Tmem205-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Tmem205 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die TMEM205-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Tmem205-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der TMEM205-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Tmem205-Exone abzielen, die für die TMEM205-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Tmem205-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom TMEM205 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom TMEM205 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Tmem205-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das TMEM205 HDR-Plasmid (m) und TMEM205 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Tmem205-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Tmem205-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.