TMEM125 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-414318

Übersicht

TMEM125 kodiert ein Multi-Pass-Transmembranprotein, dem zunehmend Funktionen bei der Organisation von Membranen und dem intrazellulären Transport zugeschrieben werden – Prozesse, die den Rezeptorumsatz und kompartimentierte Signalübertragung beeinflussen. Seine Expression wurde in mehreren Geweben beschrieben, und eine Dysregulation auf Transkript-Ebene wurde in verschiedenen Krankheitsdatensätzen beobachtet, was auf eine potenzielle Bedeutung für die zelluläre Homöostase unter Stress hindeutet. Obwohl die mechanistische Annotation bislang begrenzt ist, wird TMEM125 in funktionellen Genomik-Studien mit Fokus auf membrannahe Signalwege, Organell-Dynamik und Proteostase häufig untersucht. Diese Eigenschaften machen TMEM125 zu einem nützlichen Ziel, um zu analysieren, wie Membranproteine Signalnetzwerke und Übergänge zwischen Zellzuständen mitgestalten.

Das TMEM125 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des TMEM125-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des TMEM125-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von TMEM125 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die TMEM125-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von TMEM125-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der TMEM125-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf TMEM125-Exone abzielen, die für die TMEM125-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere TMEM125-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom TMEM125 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom TMEM125 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des TMEM125-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das TMEM125 HDR-Plasmid (h) und TMEM125 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von TMEM125-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten TMEM125-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.