Titin Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-402827-LAC

Il gene umano **TTN** codifica per la titina, una gigantesca proteina impalcatura del sarcomero che si estende dal disco Z alla linea M e integra l’elasticità meccanica con l’architettura delle miofibrille. La titina organizza il posizionamento dei filamenti spessi, contribuisce alla tensione passiva tramite domini estensibili della banda I e coordina la segnalazione meccanosensibile al disco Z e alla banda M attraverso interazioni con proteine quali telethonina, obscurina e hub di chinasi specifiche del muscolo. Grazie ai suoi ruoli nell’assemblaggio del sarcomero, nella trasmissione della forza e nel controllo di qualità delle proteine, **TTN** influenza vie che includono la meccanotrasduzione, il turnover tramite ubiquitina–proteasoma e il rimodellamento adattativo allo stress nel muscolo striato. Alterazioni genetiche e funzionali di **TTN** sono fortemente associate a cardiomiopatie e miopatie scheletriche, rendendo la regolazione della titina un tema centrale nella biologia muscolare e nella modellazione delle malattie.

Le particelle di attivazione lentivirale Titin (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di TTN in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale Titin (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione TTN, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di Titin. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo TTN e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.