Plásmido Doble Nickase (h) Tiam2: sc-404326-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)Tiam2 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa Tiam2 (h) y el plásmido de doble nickasa Tiam2 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a TIAM2. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Tiam2 Anticuerpo (C-5): sc-514090
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) Tiam2 | sc-404326-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) Tiam2 | sc-404326-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
TIAM2 codifica Tiam2, un factor de intercambio de nucleótidos de guanina (GEF) específico de Rac que promueve la conversión de Rac1/2 al estado activo unido a GTP, conectando señales ascendentes de receptores y de adhesión con la remodelación del citoesqueleto de actina. Mediante la regulación de la formación de lamelipodios, la polaridad celular y el recambio de adhesiones focales, Tiam2 contribuye a vías que controlan la migración, la invasión y el crecimiento de neuritas, incluidos nodos de señalización aguas abajo de integrinas, receptores de factores de crecimiento y PI3K. La actividad de TIAM2 se interseca con los circuitos de las GTPasas de la familia Rho y con programas asociados a MAPK que coordinan la dinámica del citoesqueleto con respuestas transcripcionales. La señalización de Rac desregulada y la expresión alterada de TIAM2 se han asociado con la motilidad de células tumorales y rasgos metastásicos en múltiples contextos oncológicos, lo que respalda su uso como diana mecanística en estudios del movimiento celular y la morfogénesis.
Tiam2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus TIAM2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de TIAM2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de TIAM2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con TIAM2 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.