Thrombospondin 5 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402797-ACT

COMP codifica a trombospondina 5, uma glicoproteína matricelular pentamérica altamente enriquecida na matriz extracelular da cartilagem, que contribui para a fibrilogênese do colágeno, a montagem da matriz e a mecanotransdução em tecidos musculoesqueléticos. Por meio de interações com colágenos, proteoglicanos e receptores de superfície celular, a trombospondina 5 influencia a adesão dos condrócitos e vias de sinalização que coordenam a proteostase do retículo endoplasmático e a homeostase da matriz extracelular. A desregulação ou variantes patogênicas em COMP estão associadas a displasias esqueléticas e fenótipos degenerativos articulares, relacionando a organização alterada da matriz a uma função cartilaginosa prejudicada. Como regulador associado à matriz, COMP é amplamente estudado em biologia da cartilagem, desenvolvimento do tecido conjuntivo e modelos de remodelamento da matriz extracelular.

Thrombospondin 5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de COMP sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Thrombospondin 5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus COMP em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição COMP, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Thrombospondin 5. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus COMP nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Thrombospondin 5 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Thrombospondin 5 em células tumorais com expressão de COMP silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.