Thrombin R Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-420264

Descripción general

F2r codifica el receptor de trombina (receptor activado por proteasas 1, PAR1), un GPCR que se activa mediante un corte proteolítico dependiente de trombina que expone un ligando anclado, iniciando la señalización intracelular a través de las vías de Gαq, Gα12/13 y Gαi. En células de ratón, el receptor de trombina regula respuestas plaquetarias y endoteliales, el tono vascular, la función de barrera y la señalización inflamatoria mediante vías efectoras como MAPK/ERK, RhoA/ROCK, la movilización de Ca²⁺ dependiente de PLCβ y programas transcripcionales asociados a NF-κB. La actividad de F2r integra la coagulación con las respuestas celulares al daño tisular y al estrés hemostático, influyendo en el diálogo cruzado tromboinflamatorio y en la remodelación vascular. La desregulación de la señalización de PAR1 se ha vinculado a modelos de trombosis, aterosclerosis, disfunción vascular asociada a sepsis e interacciones tumor–estroma en el microambiente, lo que lo hace relevante para estudios mecanísticos de la biología vascular y de enfermedades inflamatorias.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Thrombin R (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen F2r en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del F2r junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de F2r tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Thrombin R.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en F2r para la investigación de la señalización de Thrombin R, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de F2r críticos para la función de Thrombin R
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de F2r para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Thrombin R CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Thrombin R CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus F2r. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Thrombin R (m) y el plásmido HDR Thrombin R (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología F2r para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana F2r definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.