THOC1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403390-ACT

THOC1 codifica una subunità centrale del complesso THO/TREX, che accoppia la trascrizione mediata da RNA polimerasi II con il processamento del pre-mRNA e l’esportazione dell’mRNA attraverso il poro nucleare. Coordinando l’assemblaggio delle ribonucleoproteine messaggere (mRNP), THOC1 sostiene l’integrità del trascrittoma, limita l’accumulo di R-loop e contribuisce alla stabilità del genoma durante la replicazione e le risposte al danno del DNA. L’alterazione dei componenti THO/TREX è stata associata a instabilità genomica legata alla trascrizione e a programmi di espressione modificati, frequentemente studiati nella biologia dei tumori e in altri contesti proliferativi o di risposta allo stress. THOC1 umano è quindi ampiamente utilizzato come punto di ingresso meccanicistico per indagare l’accoppiamento tra trascrizione ed esportazione, la sorveglianza dell’RNA e il processamento dell’RNA associato alla cromatina.

THOC1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di THOC1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

THOC1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus THOC1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione THOC1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di THOC1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus THOC1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da THOC1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via THOC1 nelle cellule tumorali con espressione di THOC1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.