TGIF2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-416231-ACT

TGIF2 umano (TG-interacting factor 2) codifica un regolatore trascrizionale homeobox della classe TALE che modula programmi di espressione genica responsabili delle decisioni sul destino cellulare, della proliferazione e della differenziazione. TGIF2 funziona principalmente come corepressore trascrizionale associandosi alle proteine SMAD e reclutando complessi corepressori, plasmando così gli output della segnalazione TGF-β/SMAD e reti trascrizionali dello sviluppo più ampie. Attraverso queste interazioni, TGIF2 influenza programmi legati alla transizione epitelio‑mesenchimale, la specificazione di linea e un controllo della crescita dipendente dal contesto. Un’espressione o un’attività disregolata di TGIF2 è stata associata a stati trascrizionali alterati osservati in disturbi dello sviluppo e nei tumori, rendendolo rilevante per studi meccanicistici della regolazione genica dipendente dalla segnalazione.

TGIF2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di TGIF2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

TGIF2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus TGIF2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione TGIF2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di TGIF2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus TGIF2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da TGIF2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via TGIF2 nelle cellule tumorali con espressione di TGIF2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.