Plasmide CRISPR/Cas9 KO TGFβ2 (h): sc-400496

Présentation

TGFB2 code le transforming growth factor bêta 2 (TGFβ2), une cytokine sécrétée qui transmet ses signaux via des récepteurs TGF-β à activité kinase sérine/thréonine pour activer une transcription dépendante de SMAD2/3 et interagir avec des voies non canoniques telles que MAPK, PI3K/AKT et les GTPases de type Rho. TGFβ2 est un régulateur clé du remodelage de la matrice extracellulaire, de la transition épithélio-mésenchymateuse, de la modulation immunitaire et des décisions de destin cellulaire au cours du développement et du maintien de l’homéostasie tissulaire. Une dérégulation de la signalisation TGFB2 a été associée à la fibrose, à une réparation anormale des plaies et aux interactions tumeur–stroma, ce qui la rend pertinente pour l’étude de phénotypes induits par le microenvironnement. Dans des modèles cellulaires humains, la perturbation de TGFB2 permet une analyse mécanistique de la dynamique de la voie TGF-β et des programmes de régulation génique en aval.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TGFβ2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène TGFB2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du TGFB2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert TGFB2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TGFβ2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en TGFB2 pour l'étude de la signalisation de TGFβ2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de TGFB2 essentiels à la fonction de TGFβ2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de TGFB2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le TGFβ2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le TGFβ2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus TGFB2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le TGFβ2 plasmide HDR (h) et le TGFβ2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie TGFB2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles TGFB2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.