Plasmide CRISPR/Cas9 KO TFIIIB90-1 (h): sc-405826

Présentation

BRF1 code pour la sous-unité TFIIIB90-1 du facteur de transcription IIIB, un composant central de la machinerie d’initiation de l’ARN polymérase III, indispensable à la transcription des ARNt, du 5S ARNr et d’autres petits ARN non codants. En s’assemblant avec TBP et BDP1 sur les promoteurs de Pol III, TFIIIB90-1 favorise l’engagement de la chromatine, la formation du complexe de pré‑initiation et la régulation de la capacité de traduction cellulaire ainsi que des programmes de croissance. La production de Pol III est étroitement couplée à la détection des nutriments et aux signaux prolifératifs, reliant la fonction de BRF1 à la biogenèse des ribosomes, à la protéostase et à l’adaptation au stress. Une transcription Pol III dérégulée et une activité TFIIIB altérée sont fréquemment associées à des états oncogéniques et à d’autres troubles caractérisés par des besoins biosynthétiques aberrants et un contrôle du cycle cellulaire perturbé.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TFIIIB90-1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène BRF1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du BRF1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert BRF1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TFIIIB90-1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en BRF1 pour l'étude de la signalisation de TFIIIB90-1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de BRF1 essentiels à la fonction de TFIIIB90-1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de BRF1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le TFIIIB90-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le TFIIIB90-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus BRF1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le TFIIIB90-1 plasmide HDR (h) et le TFIIIB90-1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie BRF1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles BRF1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.