Plasmide CRISPR d'Activation (h) TFIIB: sc-401174-ACT

GTF2B code le facteur de transcription humain IIB (TFIIB), un composant central du complexe de pré‑initiation de l’ARN polymérase II qui aide à positionner Pol II sur les promoteurs et soutient la sélection du site de démarrage lors de la transcription basale. En assurant des interactions entre TBP/TFIID, TFIIF et Pol II, TFIIB contribue à des programmes transcriptionnels régulés qui contrôlent le cycle cellulaire, la différenciation et l’expression de gènes sensibles au stress. La perturbation de la machinerie générale de transcription peut remodeler les transcriptomes à l’échelle globale et a été associée, dans de multiples systèmes modèles, à des états transcriptionnels oncogéniques ainsi qu’à une capacité proliférative altérée. En tant que régulateur central de l’initiation par Pol II, TFIIB est couramment étudié dans le cadre de l’architecture des promoteurs, du recrutement des facteurs de transcription et du contrôle de l’expression génique dépendant de la chromatine.

TFIIB Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de GTF2B sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TFIIB Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus GTF2B dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription GTF2B, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TFIIB. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus GTF2B natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TFIIB au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TFIIB dans les cellules tumorales présentant une expression de GTF2B silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.