TET1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400845

Descripción general

TET1 (dioxigenasa de metilcitosina ten-eleven translocation 1) es una dioxigenasa dependiente de Fe(II)/2-oxoglutarato que cataliza la oxidación de la 5-metilcitosina a 5-hidroximetilcitosina y a derivados oxidados adicionales, favoreciendo la desmetilación activa del ADN y la remodelación epigenética. Mediante interacciones con reguladores transcripcionales y complejos asociados a la cromatina, TET1 ayuda a moldear los estados de metilación de promotores y potenciadores que influyen en la identidad celular, la diferenciación y la estabilidad del genoma. Los cambios en los paisajes de 5hmC vinculados a TET1 se han asociado con programas de expresión génica desregulados en contextos de cáncer y del neurodesarrollo, y con frecuencia se estudian junto con otra maquinaria de metilación del ADN, como las DNMT, y con vías metabólicas dependientes de IDH. Como interfaz entre funciones epigenéticas de “escritor/borrador”, TET1 se utiliza ampliamente para investigar el control dependiente de la metilación de redes de señalización y de la transcripción específica de linaje.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO TET1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen TET1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del TET1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de TET1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína TET1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en TET1 para la investigación de la señalización de TET1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de TET1 críticos para la función de TET1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de TET1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido TET1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido TET1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus TET1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR TET1 (h) y el plásmido HDR TET1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología TET1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana TET1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.