Testican-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406915

概要

SPOCK1は、SPARCファミリーに属する分泌性の細胞外マトリックス（ECM）プロテオグリカンであるテスチカン-1をコードし、細胞—マトリックス相互作用や細胞周囲のプロテオリシス（タンパク質分解）を調節します。テスチカン-1は、ヘパラン硫酸／コンドロイチン硫酸成分と相互作用し、さらにプロテアーゼ活性を制御することで細胞外リモデリングに影響を与え、結果として細胞接着、遊走、組織構築に作用し得ます。これらのECM依存的なプロセスを通じて、SPOCK1は浸潤性の細胞挙動、間質リモデリング、炎症性微小環境といった文脈で研究されてきました。SPOCK1の発現異常は複数の腫瘍種や、線維化あるいはリモデリング関連の病態で報告されており、微小環境に駆動される表現型を検討するための機序的ハブとして有用であることが示唆されています。

Testican-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるSPOCK1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、SPOCK1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、SPOCK1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Testican-1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Testican-1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、SPOCK1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Testican-1の機能に不可欠なSPOCK1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、SPOCK1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Testican-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびTestican-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、SPOCK1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Testican-1 HDRプラスミド（h）および Testican-1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSPOCK1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSPOCK1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。