Plasmide CRISPR d'Activation (h) Testican-1: sc-406915-ACT

SPOCK1 code le protéoglycane humain de la matrice extracellulaire Testican‑1, une glycoprotéine sécrétée et péricellulaire qui module l’organisation de la matrice et les interactions cellule–matrice. Testican‑1 a été impliquée dans la régulation de l’activité des protéases et des processus de remodelage qui influencent l’adhésion cellulaire, la migration, la croissance des neurites et l’architecture tissulaire, la reliant ainsi à des voies contrôlant la dynamique de la matrice extracellulaire et les programmes de motilité cellulaire. Une expression altérée de SPOCK1 a été rapportée dans de nombreux contextes pathologiques, notamment des cancers et des états fibrotiques ou inflammatoires, où un remodelage dérégulé de la matrice et un comportement invasif constituent des caractéristiques biologiques majeures. Par conséquent, SPOCK1/Testican‑1 est fréquemment étudié comme un régulateur dépendant du contexte de la signalisation du microenvironnement et de la plasticité phénotypique.

Testican-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SPOCK1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Testican-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SPOCK1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SPOCK1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Testican-1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SPOCK1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Testican-1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Testican-1 dans les cellules tumorales présentant une expression de SPOCK1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.