TEL Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402207-ACT

ETV6 (TEL) é um represssor transcricional da família ETS essencial para a homeostase de células-tronco e progenitoras hematopoéticas, para o comprometimento de linhagem e para a manutenção da estabilidade genômica. Por meio de seu domínio de oligomerização PNT e de seu domínio ETS de ligação ao DNA, TEL coordena programas transcricionais que moldam o controle do ciclo celular, a diferenciação e vias de sobrevivência, incluindo a regulação de redes de sinalização responsivas a citocinas. A disfunção de ETV6 está fortemente associada à biologia das doenças hematológicas, sobretudo por meio de fusões gênicas recorrentes e alterações com perda de função que modificam a regulação transcricional e o estado da cromatina. Essas características fazem de TEL um alvo amplamente estudado para investigar a reprogramação transcricional oncogênica, a evolução clonal e os mecanismos do desenvolvimento das células sanguíneas.

TEL O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ETV6 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TEL O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ETV6 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ETV6, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TEL. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ETV6 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TEL no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TEL em células tumorais com expressão de ETV6 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.