TEF-3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2): sc-423329-KO-2

Übersicht

Tead4 kodiert den Transkriptionsfaktor TEF-3, ein DNA-bindendes Protein mit TEA/ATTS-Domäne, das mit Koaktivatoren wie YAP/TAZ zusammenwirkt, um Genprogramme zu regulieren, die Proliferation, Überleben und Zellschicksalsentscheidungen steuern. In der Mausentwicklung ist TEAD4 ein entscheidender Determinant der Spezifikation des Trophektoderms und trägt über eine Hippo-Signalweg-abhängige Transkription zur epithelialen Organisation und zur Festlegung von Zelllinien bei. Die TEF-3-Aktivität integriert mechanische Signale und die Signalgebung durch vorgeschaltete Kinasen, um Zielgene zu modulieren, die an Wachstumskontrolle und Differenzierung beteiligt sind. Eine dysregulierte Signalübertragung der TEAD-Familie wurde mit veränderter Gewebehomöostase und onkogenen Transkriptionsprogrammen in Verbindung gebracht, wodurch Tead4 ein hilfreicher Knotenpunkt für die Untersuchung kontextabhängiger Transkriptionsregulation ist.

Das TEF-3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Tead4-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Tead4-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Tead4 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die TEF-3-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Tead4-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der TEF-3-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Tead4-Exone abzielen, die für die TEF-3-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Tead4-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom TEF-3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom TEF-3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Tead4-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das TEF-3 HDR-Plasmid (m) und TEF-3 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Tead4-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Tead4-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.