TECPR2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-411378

Panoramica

TECPR2 (tectonin beta-propeller repeat containing 2) codifica una grande proteina citosolica di impalcatura implicata nel traffico di membrane correlato all’autofagia e nella proteostasi. Attraverso interazioni con il macchinario dell’autofagia, TECPR2 supporta la gestione del carico e le fasi di trasporto vescicolare che influenzano il turnover di proteine mal ripiegate e di organelli danneggiati, processi centrali per l’omeostasi neuronale. L’alterazione genetica di TECPR2 è stata associata a fenotipi neuroevolutivi e neurodegenerativi, coerentemente con un ruolo nel mantenimento di tipi cellulari longevi con un’elevata richiesta di proteostasi. TECPR2 è quindi rilevante per lo studio della regolazione dell’autofagia, del traffico intracellulare e delle vie di risposta allo stress in modelli cellulari umani.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TECPR2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene TECPR2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del TECPR2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto TECPR2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TECPR2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di TECPR2 per lo studio della segnalazione di TECPR2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni TECPR2 critici per la funzione di TECPR2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di TECPR2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal TECPR2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal TECPR2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus TECPR2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal TECPR2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR TECPR2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia TECPR2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio TECPR2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.