Tctex2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423317

Übersicht

Tcte3 kodiert Tctex2, ein mit Dynein-Leichtketten assoziiertes Protein, das an mikrotubulusbasierten Transportprozessen beteiligt ist, die die Zellpolarität und Motilität unterstützen. In der Maus wird Tctex2 am stärksten mit der Funktion von Zilien und Flagellen in Verbindung gebracht, wo dyneinvermittelte Bewegung und Frachttransport für die axonemale Dynamik und die Spermienmotilität essenziell sind. Störungen von Dynein-Zubehörkomponenten können die Ziliogenese, den intraflagellären Transport und die zentrosomenbezogene Organisation beeinträchtigen und dadurch messbare Effekte auf Zellsignale und Entwicklungs-Musterbildung verursachen. Entsprechend ist Tcte3/Tctex2 für die Forschung zu zilienassoziierten Phänotypen, Modellen männlicher Infertilität und Mechanismen relevant, die den zytoskelettalen Transport mit der Gewebehomöostase verknüpfen.

Das Tctex2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Tcte3-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Tcte3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Tcte3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Tctex2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Tcte3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Tctex2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Tcte3-Exone abzielen, die für die Tctex2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Tcte3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Tctex2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Tctex2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Tcte3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Tctex2 HDR-Plasmid (m) und Tctex2 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Tcte3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Tcte3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.