Plasmide CRISPR/Cas9 KO TCF-3 (h): sc-400821

Présentation

TCF7L1 code le facteur de transcription TCF-3, une protéine de liaison à l’ADN du groupe à haute mobilité (HMG) qui agit comme un régulateur contextuel de l’expression génique en aval de la signalisation canonique Wnt/β-caténine. En s’associant à la β-caténine ou à des corépresseurs transcriptionnels, TCF-3 contribue à contrôler les décisions de destinée cellulaire, la prolifération et les programmes de spécification de lignée, notamment le maintien des cellules souches et progénitrices. L’activité de TCF7L1 s’inscrit à l’interface de voies du développement et de la différenciation et participe à la régulation de l’état de la chromatine au niveau des enhancers sensibles à Wnt. La dérégulation de la signalisation TCF7L1/TCF-3 a été étudiée en lien avec des états de différenciation altérés et des phénotypes prolifératifs dans des modèles cellulaires pertinents pour la maladie, y compris des perturbations de la voie Wnt associées au cancer.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TCF-3 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène TCF7L1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du TCF7L1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert TCF7L1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TCF-3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en TCF7L1 pour l'étude de la signalisation de TCF-3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de TCF7L1 essentiels à la fonction de TCF-3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de TCF7L1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le TCF-3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le TCF-3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus TCF7L1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le TCF-3 plasmide HDR (h) et le TCF-3 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie TCF7L1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles TCF7L1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.