TBX6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-405632

Übersicht

TBX6 kodiert einen Transkriptionsfaktor der T-Box-Familie, der während der frühen menschlichen Entwicklung die Spezifizierung des Mesoderms und die Musterbildung des paraxialen Mesoderms reguliert und dabei Genprogramme koordiniert, die die Somitenbildung und die Segmentierung der Wirbelkörper antreiben. Es wirkt in transkriptionellen Netzwerken, die entwicklungsbiologische Signaleingänge – darunter Notch- und WNT/β-Catenin-Signalwege – integrieren, um die Linienfestlegung und die axiale Organisation zu steuern. Eine veränderte TBX6-Dosis oder -Funktion wurde mit angeborenen Fehlbildungen der Wirbelsäule und der Rippen in Verbindung gebracht, was TBX6 zu einem geeigneten Ansatzpunkt für die Untersuchung der genetischen Architektur der Wirbelentwicklung macht. In Zellmodellen wird die Perturbation von TBX6 häufig genutzt, um Differenzierungsverläufe, Enhancer-Logik und durch Transkriptionsfaktoren gesteuerte Schicksalsentscheidungen zu analysieren.

Das TBX6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des TBX6-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des TBX6-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von TBX6 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die TBX6-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von TBX6-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der TBX6-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf TBX6-Exone abzielen, die für die TBX6-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere TBX6-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom TBX6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom TBX6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des TBX6-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das TBX6 HDR-Plasmid (h) und TBX6 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von TBX6-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten TBX6-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.