TBX5 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-423282-ACT

Tbx5 codifica o fator de transcrição da família T-box TBX5, um regulador que se liga ao DNA de forma específica de sequência e coordena programas gênicos do desenvolvimento que controlam a formação das câmaras cardíacas, a maturação do sistema de condução e a morfogênese dos membros anteriores em camundongos. O TBX5 atua em conjunto com cofatores como NKX2-5 e GATA4 para regular redes de enhancers e estados de cromatina que moldam a especificação de linhagens e o padrão de organização dos tecidos. Sua atividade se integra a vias de controle transcricional que governam a diferenciação de cardiomiócitos, o acoplamento elétrico e a morfogênese estrutural. Alterações na dosagem de TBX5 ou em sua função regulatória estão associadas a malformações congênitas do coração e dos membros, tornando-o um nó fundamental para modelar a desregulação do desenvolvimento in vivo e em sistemas baseados em células-tronco.

TBX5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Tbx5 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TBX5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Tbx5 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Tbx5, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TBX5. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Tbx5 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TBX5 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TBX5 em células tumorais com expressão de Tbx5 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.