Plásmido CRISPR de Activación (h) TAZ: sc-400320-ACT

WWTR1 codifica el coactivador transcripcional TAZ (TAFAZ), un efector central de la vía de señalización Hippo que conecta el contacto célula–célula, las señales mecánicas y la polaridad con programas transcripcionales que controlan la proliferación, la diferenciación y el crecimiento tisular. Cuando las quinasas de Hippo están inactivas, TAZ se acumula en el núcleo y coopera con factores de transcripción de la familia TEAD para regular genes implicados en la remodelación de la matriz extracelular, la plasticidad epitelio‑mesénquima y los estados celulares tipo madre. La actividad aberrante de WWTR1/TAZ se asocia con una mecanotransducción desregulada y una especificación de linaje alterada en múltiples contextos patológicos, incluidos programas transcripcionales asociados al cáncer y la remodelación fibrótica. Estas características hacen de TAZ un nodo ampliamente utilizado para estudiar las salidas de YAP/TAZ–TEAD, la comunicación cruzada con las vías Wnt y TGF‑β, y el control transcripcional dependiente del contexto.

TAZ El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de WWTR1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

TAZ El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus WWTR1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional WWTR1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de TAZ. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo WWTR1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de TAZ en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía TAZ en células tumorales con expresión de WWTR1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.