TAO2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402320-ACT

Das humane Gen **TAOK2** kodiert **TAO2**, eine Serin/Threonin-Kinase der Ste20-Familie, die im MAPK-Signalweg stromaufwärts wirkt, insbesondere in den stressaktivierten JNK- und p38-Signalwegen. TAO2 trägt zur Umgestaltung des Zytoskeletts und zur Organisation der Mikrotubuli bei und verknüpft extrazelluläre oder genotoxische Stresssignale mit Veränderungen der Zellmorphologie, Migration und Überlebensprogramme. In Neuronen wurde die TAOK2-Aktivität mit der Entwicklung von Dendriten und Spines sowie mit synaptischer Signalübertragung in Verbindung gebracht und unterstützt damit Funktionen in neurodevelopmentalen Schaltkreisen. Eine dysregulierte TAOK2-Signalgebung und Varianten im entsprechenden Genlokus wurden mit neurodevelopmentalen Phänotypen und veränderter Stressantwort-Signalübertragung assoziiert, wodurch TAOK2 einen relevanten Knotenpunkt für mechanistische Studien in der Hirn- und Zellstressbiologie darstellt.

TAO2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen TAOK2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

TAO2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des TAOK2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der TAOK2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen TAO2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native TAOK2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von TAO2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des TAO2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem TAOK2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.