Tankyrase-2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-403925

Panoramica

TNKS2 codifica la tankirasi-2, una poli(ADP-ribosio) polimerasi della famiglia PARP che regola la stabilità proteica e la segnalazione tramite un turnover dipendente dalla PARilazione. La tankirasi-2 promuove la degradazione dei substrati mediata dall’ubiquitina, come AXIN, modulando così l’attività della via Wnt/β-catenina e i programmi trascrizionali a valle che controllano proliferazione e differenziamento. Contribuisce inoltre al mantenimento dei telomeri attraverso l’interazione con TRF1 e influenza la progressione mitotica e l’organizzazione del fuso. Un’attività di tankirasi deregolata è stata collegata a un’alterata segnalazione Wnt e a difetti di mantenimento del genoma rilevanti per la trasformazione oncogenica e altre patologie proliferative.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Tankyrase-2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene TNKS2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del TNKS2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto TNKS2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Tankyrase-2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di TNKS2 per lo studio della segnalazione di Tankyrase-2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni TNKS2 critici per la funzione di Tankyrase-2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di TNKS2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Tankyrase-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Tankyrase-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus TNKS2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Tankyrase-2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Tankyrase-2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia TNKS2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio TNKS2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.