T2R38 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-402279

Übersicht

TAS2R38 kodiert den Bittergeschmacksrezeptor T2R38, einen GPCR der Klasse A, der thiourea-haltige Verbindungen wie PTC/PROP erkennt und über gustducin-assoziierte Signalwege koppelt, um intrazelluläre Second Messenger – einschließlich Ca²⁺-Flüsse – in chemosensorischen Zellen zu modulieren. Über die orale Geschmackswahrnehmung hinaus wird T2R38 auch in extraoralen Epithelien exprimiert, wo die Bitterrezeptor-Signalgebung zur chemosensorischen Überwachung sowie zur Regulation epithelialer Antworten beiträgt. Häufige TAS2R38-Haplotypen verändern die Rezeptorsensitivität und wurden als genetische Determinanten der Bittergeschmackswahrnehmung und der Variabilität chemosensorisch getriebener Verhaltensweisen untersucht. Als GPCR-gekoppelter Sensorikrezeptor stellt T2R38 ein gut handhabbares Modell dar, um Rezeptor-Signalgebung, Expressionskontrolle und Genotyp-Phänotyp-Beziehungen in humanen Zellsystemen zu analysieren.

Das T2R38 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des TAS2R38-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des TAS2R38-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von TAS2R38 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die T2R38-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von TAS2R38-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der T2R38-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf TAS2R38-Exone abzielen, die für die T2R38-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere TAS2R38-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom T2R38 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom T2R38 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des TAS2R38-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das T2R38 HDR-Plasmid (h) und T2R38 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von TAS2R38-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten TAS2R38-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.