Tβ-4 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422497

Panoramica

Tmsb4x codifica la timosina β-4 (Tβ-4), un peptide altamente conservato che sequestra l’actina, regolando la disponibilità di G-actina e supportando il rimodellamento dinamico del citoscheletro. Nelle cellule murine, Tβ-4 influenza processi quali migrazione e adesione cellulare, motilità associata alla riparazione delle ferite e organizzazione del citoscheletro, tramite la modulazione della polimerizzazione dell’actina e di segnali a valle collegati alle adesioni focali e alle vie delle GTPasi della famiglia Rho. Modellando il traffico dipendente dall’actina e le risposte cellulari allo stress, Tmsb4x è stato studiato in contesti quali infiammazione, rimodellamento tissutale, programmi angiogenici e progressione fibrotica. Una dinamica dell’actina deregolata associata a un’alterata attività di Tβ-4 può influire su fenotipi proliferativi e migratori rilevanti per la biologia del cancro e per la funzione delle cellule immunitarie.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Tβ-4 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Tmsb4x in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Tmsb4x insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Tmsb4x a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Tβ-4.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Tmsb4x per lo studio della segnalazione di Tβ-4, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Tmsb4x critici per la funzione di Tβ-4
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Tmsb4x per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Tβ-4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Tβ-4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Tmsb4x. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Tβ-4 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Tβ-4 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Tmsb4x per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Tmsb4x definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.