Plasmide CRISPR d'Activation (h) Syne-2: sc-403318-ACT

SYNE2 code pour Syne-2 (nesprine-2), un composant central du complexe LINC qui relie l’enveloppe nucléaire au cytosquelette d’actine via des interactions avec les protéines SUN. En couplant le noyau aux forces du cytosquelette, Syne-2 contribue au positionnement du noyau, à la mécanotransduction, à la polarisation cellulaire et à la migration, et participe au maintien de l’architecture nucléaire lors de la division et de la différenciation cellulaires. Les voies dépendantes de SYNE2 sont fréquemment étudiées dans des contextes de remodelage du cytosquelette et d’organisation du génome, des altérations de la fonction des nesprines étant impliquées dans des phénotypes neuromusculaires et cardiomyopathiques, ainsi que dans des modifications de la morphologie nucléaire et de l’invasivité associées au cancer. Ces caractéristiques font de SYNE2 une cible utile pour étudier la régulation génique dépendante des forces et l’intégrité de l’enveloppe nucléaire dans des modèles de cellules humaines.

Syne-2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SYNE2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Syne-2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SYNE2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SYNE2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Syne-2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SYNE2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Syne-2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Syne-2 dans les cellules tumorales présentant une expression de SYNE2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.