Syne-1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402804

Descripción general

SYNE1 codifica Syne-1 (nesprina-1), un gran andamio con repeticiones de espectrina del complejo LINC que acopla el núcleo al citoesqueleto mediante interacciones con proteínas SUN, actina y filamentos intermedios. Al regular el posicionamiento nuclear, la mecanotransducción y la organización del citoesqueleto, Syne-1 influye en procesos como la migración celular, la polaridad y la arquitectura tisular. La alteración de SYNE1 se ha vinculado a fenotipos del neurodesarrollo y neurodegenerativos, incluida la ataxia cerebelosa autosómica recesiva, y también se ha descrito en estudios de genómica del cáncer, donde un acoplamiento núcleo-citoesqueleto alterado puede afectar la estabilidad del genoma y el comportamiento celular. Estas características convierten a SYNE1 en una diana relevante para investigar la biología de la envoltura nuclear, la transmisión de fuerzas y los fenotipos celulares asociados a enfermedad en sistemas modelo humanos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Syne-1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen SYNE1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del SYNE1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de SYNE1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Syne-1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en SYNE1 para la investigación de la señalización de Syne-1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de SYNE1 críticos para la función de Syne-1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de SYNE1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Syne-1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Syne-1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus SYNE1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Syne-1 (h) y el plásmido HDR Syne-1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología SYNE1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana SYNE1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.