Plasmide CRISPR/Cas9 KO Synaptogyrin-3 (m): sc-423240

Présentation

Syngr3 code la synaptogyrine‑3, une protéine membranaire tétraspanine des vésicules synaptiques, enrichie dans les terminaisons présynaptiques, qui contribue au trafic vésiculaire et à la dynamique de libération des neurotransmetteurs. La synaptogyrine‑3 participe à l’exocytose régulée et aux processus de recyclage endocytaire qui modèlent la transmission et la plasticité synaptiques, en interagissant avec la machinerie centrale du cycle des vésicules synaptiques. Des altérations de la fonction de la famille des synaptogyrines ont été associées à des perturbations de l’activité des réseaux neuronaux et de l’homéostasie synaptique, ce qui rend Syngr3 pertinent pour l’étude des mécanismes neurodéveloppementaux et neurodégénératifs. Dans des modèles murins, la perturbation de Syngr3 est utile pour disséquer les contributions présynaptiques à des phénotypes à l’échelle des circuits et à la signalisation dépendante de l’activité.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Synaptogyrin-3 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Syngr3 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Syngr3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Syngr3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Synaptogyrin-3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Syngr3 pour l'étude de la signalisation de Synaptogyrin-3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Syngr3 essentiels à la fonction de Synaptogyrin-3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Syngr3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Synaptogyrin-3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Synaptogyrin-3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Syngr3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Synaptogyrin-3 plasmide HDR (m) et le Synaptogyrin-3 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Syngr3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Syngr3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.