Synapsin Ia/b Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423233

Descripción general

Syn1 codifica la sinapsina Ia/b, una fosfoproteína específica de las neuronas que se asocia con las vesículas sinápticas y el citoesqueleto de actina para regular el agrupamiento de vesículas, el mantenimiento del pool de reserva y la liberación de neurotransmisores dependiente de la actividad. La sinapsina Ia/b está modulada por cascadas de fosforilación dependientes de calcio y de AMPc, lo que vincula la descarga neuronal con la movilización de vesículas sinápticas y la plasticidad presináptica. A través de estos procesos, Syn1 contribuye a la maduración de los circuitos, la estabilidad de las sinapsis y la plasticidad sináptica a corto plazo que moldean el procesamiento de la información en el sistema nervioso central. La alteración de la señalización de sinapsina se ha implicado en fenotipos del neurodesarrollo y neuropsiquiátricos, y se estudia ampliamente en relación con la susceptibilidad a las convulsiones y la disfunción sináptica.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Synapsin Ia/b (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Syn1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Syn1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Syn1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Synapsin Ia/b.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Syn1 para la investigación de la señalización de Synapsin Ia/b, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Syn1 críticos para la función de Synapsin Ia/b
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Syn1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Synapsin Ia/b CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Synapsin Ia/b CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Syn1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Synapsin Ia/b (m) y el plásmido HDR Synapsin Ia/b (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Syn1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Syn1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.