Svs5 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423227

Panoramica

Svs5 codifica la proteina secretoria 5 delle vescicole seminali (Svs5), una proteina del tratto riproduttivo del topo associata alle secrezioni delle ghiandole accessorie maschili e all’ambiente post-eiaculatorio. Le proteine della famiglia Svs sono implicate in processi quali la coagulazione del liquido seminale, la protezione degli spermatozoi e la modulazione della funzione spermatica attraverso interazioni con reti proteiche extracellulari e rimodellamento proteolitico. Sebbene Svs5 sia meno caratterizzata rispetto ad alcune proteine correlate delle vescicole seminali, il suo profilo di espressione la rende rilevante per studi sui programmi genici regolati dagli androgeni, sulla fisiologia riproduttiva e sui fattori che influenzano i fenotipi di fertilità maschile. Un’alterata regolazione delle proteine secretorie delle ghiandole accessorie può chiarire i meccanismi alla base della subfertilità e della biologia del tratto riproduttivo in modelli murini.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Svs5 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Svs5 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Svs5 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Svs5 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Svs5.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Svs5 per lo studio della segnalazione di Svs5, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Svs5 critici per la funzione di Svs5
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Svs5 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Svs5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Svs5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Svs5. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Svs5 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Svs5 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Svs5 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Svs5 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.