SUV420H2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-404626

Übersicht

KMT5C kodiert die Lysin-Methyltransferase SUV420H2, ein chromatinmodifizierendes Enzym, das die Trimethylierung von Histon H4 an Lysin 20 (H4K20me3) katalysiert. Diese Markierung ist in Heterochromatin angereichert und unterstützt eine höherstufige Chromatinkompaktierung, die Kontrolle des Replikationstimings sowie die Aufrechterhaltung der Genomstabilität durch die Regulation der Wahl von DNA-Reparaturwegen. Die SUV420H2-Aktivität ist in epigenetische Silencing-Programme und zellzyklusgekoppeltes Chromatin-Remodeling eingebunden und beeinflusst die Transkriptionsrepression an repetitiven Elementen und linienspezifischen Loci. Eine Fehlregulation der H4K20-Methylierungsmuster und eine veränderte SUV420H2-Expression wurden mit aberranten Chromatinzuständen in Krebs und anderen Kontexten mit Genominstabilität in Verbindung gebracht, was KMT5C zu einem nützlichen Knotenpunkt für mechanistische Studien mit epigenetischem Schwerpunkt macht.

Das SUV420H2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des KMT5C-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des KMT5C-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von KMT5C nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die SUV420H2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von KMT5C-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der SUV420H2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf KMT5C-Exone abzielen, die für die SUV420H2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere KMT5C-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom SUV420H2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom SUV420H2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des KMT5C-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das SUV420H2 HDR-Plasmid (h) und SUV420H2 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von KMT5C-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten KMT5C-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.