SURF-1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423219
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- SURF-1 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico SURF-1, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: SURF-1 Anticuerpo (H-7): sc-365159
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
SURF-1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-423219 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
Surf1 codifica SURF-1, una proteína conservada de la membrana interna mitocondrial necesaria para el ensamblaje adecuado de la citocromo c oxidasa (complejo IV) en la cadena de transporte de electrones. Al coordinar la biogénesis del complejo IV, SURF-1 favorece la fosforilación oxidativa, el mantenimiento del potencial de membrana mitocondrial y una producción eficiente de ATP celular. La alteración de la función de SURF1 se asocia con deficiencia del complejo IV mitocondrial y fenotipos neurodegenerativos tipo síndrome de Leigh, lo que subraya su importancia en tejidos de alta demanda energética. En sistemas murinos, la perturbación de Surf1 se utiliza ampliamente para investigar la proteostasis mitocondrial, la remodelación de la cadena respiratoria y la señalización sensible al estrés asociada a una bioenergética deteriorada.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO SURF-1 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Surf1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Surf1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Surf1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína SURF-1.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Surf1 para la investigación de la señalización de SURF-1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Surf1 críticos para la función de SURF-1
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Surf1 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido SURF-1 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido SURF-1 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Surf1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR SURF-1 (m) y el plásmido HDR SURF-1 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Surf1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Surf1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.