SUN2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-404746

Panoramica

SUN2 codifica una proteina della membrana nucleare interna contenente un dominio SUN, che rappresenta un componente centrale del complesso LINC (linker of nucleoskeleton and cytoskeleton). Legandosi alle lamine nucleari e interagendo con proteine contenenti il dominio KASH attraverso lo spazio perinucleare, SUN2 collega il nucleo al citoscheletro di actina per regolare il posizionamento nucleare, la meccanotrasduzione e la trasmissione delle forze citoscheletriche. SUN2 contribuisce all’integrità dell’involucro nucleare, all’organizzazione della cromatina e alle risposte al danno del DNA che dipendono da una corretta connettività nucleo-citoscheletrica. La disregolazione dei componenti del complesso LINC, inclusa SUN2, è stata associata a fenotipi rilevanti per le laminopatie, la cardiomiopatia, disturbi muscolari e cambiamenti dell’architettura nucleare associati al cancro.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO SUN2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene SUN2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del SUN2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto SUN2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina SUN2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di SUN2 per lo studio della segnalazione di SUN2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni SUN2 critici per la funzione di SUN2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di SUN2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal SUN2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal SUN2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus SUN2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal SUN2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR SUN2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia SUN2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio SUN2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.