SUCLA2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423214

Panoramica

Sucla2 codifica la subunità beta murina SUCLA2 della succinil-CoA sintetasi (ADP-formante), un enzima della matrice mitocondriale che catalizza la conversione reversibile del succinil-CoA in succinato con produzione di ATP nel ciclo degli acidi tricarbossilici (TCA). Attraverso questa reazione, SUCLA2 supporta il metabolismo ossidativo, il flusso anaplerotico e il coordinamento tra il ciclo TCA e l’utilizzo del succinil-CoA legato alla sintesi dell’eme e ai corpi chetonici. La funzione di SUCLA2 è strettamente connessa all’omeostasi energetica mitocondriale e all’equilibrio dei nucleotidi, e l’alterazione di questa via è associata ai fenotipi di encefalomiopatia mitocondriale e ai difetti di mantenimento del mtDNA riportati nei disturbi mitocondriali correlati a SUCLA2. Nei modelli murini, Sucla2 è quindi rilevante per studiare le risposte allo stress metabolico, la vulnerabilità neuromuscolare e i meccanismi che collegano gli enzimi del ciclo TCA alla stabilità del genoma mitocondriale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO SUCLA2 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Sucla2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Sucla2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Sucla2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina SUCLA2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Sucla2 per lo studio della segnalazione di SUCLA2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Sucla2 critici per la funzione di SUCLA2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Sucla2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal SUCLA2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal SUCLA2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Sucla2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal SUCLA2 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR SUCLA2 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Sucla2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Sucla2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.