Plasmide CRISPR/Cas9 KO Stra6 (h): sc-405364

Présentation

STRA6 code Stra6, un récepteur membranaire multipasse qui médie l’absorption cellulaire de la vitamine A en se liant, à la surface cellulaire, aux complexes rétinol–protéine de liaison du rétinol (RBP). En contrôlant la disponibilité intracellulaire des rétinoïdes, Stra6 influence la signalisation de l’acide rétinoïque et les programmes transcriptionnels en aval qui régulent la différenciation, l’homéostasie épithéliale et la mise en place des patrons développementaux. L’activité de STRA6 s’articule avec des réseaux du métabolisme des rétinoïdes impliquant LRAT, les enzymes RDH/ALDH et les récepteurs nucléaires de l’acide rétinoïque, façonnant ainsi les décisions de destinée cellulaire et l’intégrité des tissus. Une dérégulation ou des variations génétiques de STRA6 ont été associées à des anomalies du développement et à des phénotypes liés à la vision, compatibles avec une perturbation du transport et de la signalisation des rétinoïdes.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Stra6 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène STRA6 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du STRA6, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert STRA6 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Stra6.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en STRA6 pour l'étude de la signalisation de Stra6, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de STRA6 essentiels à la fonction de Stra6
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de STRA6 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Stra6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Stra6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus STRA6. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Stra6 plasmide HDR (h) et le Stra6 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie STRA6 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles STRA6 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.