Plásmido CRISPR de Activación (h) STOML2: sc-403638-ACT

STOML2 (proteína 2 similar a la estomatina) es una proteína asociada a la membrana interna mitocondrial, implicada en la organización de microdominios de membrana que favorecen la biogénesis mitocondrial y la función de la cadena respiratoria. Contribuye a la proteostasis y a la dinámica mitocondrial al influir en el ensamblaje de complejos proteicos y mantener la integridad de las crestas, vinculándose así al metabolismo energético celular y a la adaptación al estrés. La alteración de la expresión de STOML2 se ha asociado con cambios en la fosforilación oxidativa, el manejo de especies reactivas de oxígeno y la sensibilidad a la apoptosis, procesos estudiados con frecuencia en biología del cáncer y neurodegeneración. Como factor regulador de la mitocondria, STOML2 se investiga habitualmente en vías que conectan la reprogramación metabólica, el control de calidad mitocondrial y la señalización de supervivencia celular.

STOML2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de STOML2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

STOML2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus STOML2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional STOML2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de STOML2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo STOML2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de STOML2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía STOML2 en células tumorales con expresión de STOML2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.