Stim2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-431161

Visão geral

Stim2 (molécula de interação estromal 2) é um sensor de Ca2+ do retículo endoplasmático que acopla a depleção dos estoques de Ca2+ do RE à entrada de cálcio operada por estoques (SOCE), regulando a atividade dos canais Orai nas junções entre o RE e a membrana plasmática. Em células de camundongo, a STIM2 ajuda a manter níveis basais de Ca2+ citosólico e ajusta a amplitude e a duração da sinalização dependente de Ca2+, o que impacta a transcrição dirigida por NFAT, a função sináptica e programas de ativação de células imunes. Por meio dessas redes de sinalização de cálcio, a Stim2 está associada a processos que incluem excitabilidade e plasticidade neuronais, respostas de citocinas e adaptação ao estresse celular. A SOCE desregulada e a sinalização dependente de STIM2 têm sido implicadas em mecanismos relevantes para doenças, como neuroinflamação, autoimunidade e alterações em vias de sobrevivência celular, tornando a Stim2 um alvo útil para estudos mecanísticos.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Stim2 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Stim2 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Stim2, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Stim2 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Stim2.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Stim2 para a investigação da sinalização de Stim2, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Stim2 críticos para a função Stim2
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Stim2 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo Stim2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo Stim2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Stim2. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo Stim2 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR Stim2 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Stim2 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Stim2 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.