Partículas Lentivirales de Activación (m) STC1: sc-423182-LAC

La estaniocalcina 1 (Stc1) del ratón codifica la glucoproteína secretada STC1, un factor pleiotrópico tipo hormona implicado en la homeostasis del calcio y el fosfato y en una amplia señalización adaptativa al estrés. STC1 influye en el metabolismo celular, el equilibrio redox y la función mitocondrial, y se ha vinculado a vías que regulan la proliferación, la apoptosis, los programas angiogénicos y las respuestas inflamatorias. En diversos tejidos, la expresión de STC1 está modulada por la hipoxia y la señalización de factores de crecimiento, y puede remodelar la comunicación célula–célula dentro de los microambientes. La desregulación de STC1 se ha asociado con fenotipos relevantes para la biología del cáncer, la lesión isquémica, la fibrosis y contextos de enfermedades mediadas por el sistema inmunitario, lo que convierte a Stc1 en un objetivo útil para estudios mecanísticos.

Las partículas de activación lentiviral STC1 (m) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Stc1 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral STC1 (m) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Stc1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de STC1. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Stc1 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.